Test para la detección y genotipado de VPH de alto y bajo riesgo

Al tomar el hisopo, se recomienda almacenarlo sin ningún medio de transporte. Si se añade PBS (porque se realizan otros exámenes que lo requieren), la muestra debe almacenarse congelada hasta la extracción. De lo contrario, podrían crecer otros microorganismos, aumentando la cantidad de ADN y degradando la muestra. Antes de la extracción, se resuspende el hisopo seco en 500 µl de PBS en un tubo de 1,5 ml, mezclando con vórtex durante 1 minuto. A continuación, se centrifuga el tubo durante 2 minutos, a 18.000 g. Tras desechar el sobrenadante, se añaden 500 µl de PBS, y se resuspende el pellet mediante vórtex. Centrifugar el tubo durante 2 minutos, a 18.000 g. Descartar el sobrenadante. Resuspender el pellet con 200 µl de PBS, y proceder como se indica en el protocolo (20 µl de proteinasa K + 20 µl de tampón AL, etc.). De este modo, se eliminará el material interferente y la PCR será más “limpia”.

Para la toma de muestra, se recomienda utilizar una torunda de algodón o cepillo seco y estéril. Hay que asegurarse de tomar una cantidad suficiente de muestra, pero sin que se produzca el sangrado de la lesión. Posteriormente se guardará la torunda en su tubo, sin utilizar ningún medio conservante. Mantenerla a 2/8 ºC si se va a procesar en menos de una semana, o a -20ºC si se va a procesar más adelante.

No, no es necesaria la presencia de lesiones. El diagnóstico se puede realizar antes de la aparición de las lesiones.

Los kits de auto-toma no se han validado. Por lo tanto, en principio, es aconsejable que la toma sea realizada por un profesional sanitario.

Una posible explicación es que la paciente se infecte y recupere entre los análisis. Si la infección es leve y el sistema inmune está fuerte, la paciente puede superar la infección y que, para el siguiente análisis, se haya contagiado de nuevo con otros tipos. Existe también la posibilidad de que la paciente tenga co-infecciones con varios tipos de VPH, pero que todos ellos posean una carga vírica muy baja. En estos casos, es posible que no lleguen a amplificarse todos los tipos en cada ensayo, sino que se amplifiquen de forma aleatoria. Dado que no se repiten los tipos no parece probable, pero no se puede descartar. Otra razón podría ser que hubiese habido contaminaciones en los diferentes ensayos. Es poco probable que se haya dado en varios ensayos de forma diferente, pero siempre hay que comprobarlo poniendo blancos en todos los ensayos para asegurar la veracidad de los resultados.

Posiblemente se trate de una contaminación. Se deberán analizar blancos: si son correctos, entonces el resultado es válido. No debe extrañar porque la infección múltiple en estos casos es frecuente. En cambio, si el análisis de blancos sale contaminando, entonces existe contaminación. En ese caso se debe desechar los reactivos y realizar el protocolo de limpieza. No se deben analizar más muestras hasta que se obtengan varios blancos válidos. Para más información, ver tabla XXX.

Puede tratarse de un tipo no presente en el kit o que esté a poca concentración.